Сравнительные испытания методов и тест-систем при серодиагностике инфекционных болезней птиц

Серова Н.Ю., Хохлачёв О.Ф., Сапегина Е.В., Фёдорова Л.Л. НПП «АВИВАК»

Достижения современной науки значительно расширили практические возможности при диагностике инфекционных болезней птиц. С развитием гибридомной технологии и приёмов молекулярного клонирования разработаны новые и совершенствуются уже известные методы иммунного анализа. Это позволяет ветеринарным специалистам птицехозяйств ещё более оперативно и достоверно контролировать иммунный статус птицепоголовья и обеспечивать эпизоотическое благополучие хозяйств.

Российский ветеринарный рынок диагностических биопрепаратов для птицеводства в настоящее время широко представлен препаратами отечественного и зарубежного производства. Среди них достойное место занимают тест-системы на основе непрямого твердофазного вариантов иммуноферментного анализа «ИФА-АВИВАК» (Россия) и ELISA – «BioChek» (Голландия).

В задачу наших исследований входило сравнительное изучение тест-систем «ИФА-АВИВАК» и ELISA – «BioChek» по основным тестируемым показателям – специфичности и чувствительности при серодиагностике инфекционного бронхита кур (ИБК, IBV), инфекционной бурсальной болезни (ИББ, IBD), инфекционного энцефаломиелита (ИЭМ, AE), респираторного микоплазмоза (МГ, MG) и инфекционного синовита (МС, MS).

Дополнительно проведено сравнение двух методов диагностики синдрома снижения яйценоскости кур (ССЯ-76, EDS’76) в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и в ИФА с использованием тест-системы ELISA – «BioChek».

М АТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В работе использовали коммерческие наборы на основе непрямого твердофазного варианта иммуноферментного анализа для определения антител к вирусу ИБК, ИББ, ИЭМ, ССЯ-76, а также МГ и МС производства НПП «АВИВАК» и «BioChek». Постановку ИФА проводили в соответствии с инструкцией к каждому набору. Пробы исследуемых сывороток разводили в соотношении 1:400 для «ИФА-АВИВАК» и 1:500 для «BioChek». Учет результатов реакции осуществляли с помощью диагностических компьютерных программам «ИФА АВИВАК» и «BioChek» с измерением оптической плотности на спектрофотометре «SLT» при длине волны 405 нм.

Рекомендуем прочитать:  Мазь Анандин — инструкция по применению в ветеринарии

Реакцию торможения гемагглютинации ставили общепринятым методом с инактивированным антигеном вируса ССЯ-76, штамм «В8/78» в рабочем разведении 4 ГАЕ/0,025 мл. Среднюю величину титра специфических антигемагглютининов определяли по Brugh J. (2)

В работе использовали «парные» пробы сыворотки крови, полученные от вакцинированных цыплят и кур разного возраста из птицехозяйств различных регионов РФ. Сыворотки не содержали консервантов и до исследования хранились при температуре – 24С. Для РТГА сыворотку инактивировали при 56С в течение 30 мин.

Р ЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Полученные результаты ИФА и РТГА исследований представлены в табл. 1 – 2 и на рис. 1 – 16.

При анализе полученных результатов ИФА-исследований установлена сравнительно высокая эффективность испытуемых тест-систем. Выявленный уровень сероконверсии при оценке качества поствакцинального иммунитета у птиц разных возрастных групп показал одинаково высокую специфичность испытуемых тест-систем. При анализе полученных данных в отношении чувствительности установлена идентичность тест-систем по ИББ (IBD), ИБК (IBV) и МС (MS). Тест-системы «BioChek» показали более высокую чувствительность по ИЭМ (AE), однако были сравнительно менее чувствительны в отношении МГ (MG).

Таблица 1. Средний титр антител при исследовании сыворотки крови кур в «ИФА – АВИВАК» и «BioChek»

Птичник

Возраст,
дн.

ИБК

ИББ

МС

ИЭМ

МГ

«АВИВАК»

«BioChek»

«АВИВАК»

«BioChek»

«АВИВАК»

«BioChek»

«АВИВАК»

«BioChek»

«АВИВАК»

«BioChek»

2

84

4071

4682

19283

20451

265

130

245

318

12399

3565

2

98

3817

4335

20024

21596

1206

2393

167

553

8173

1292

2

16

3508

4452

14057

17026

7291

5019

4556

10713

10553

1171

2

163

7066

5922

16346

18348

6692

4324

5315

12042

19425

4685

9

70

5835

7914

19387

20156

42

979

151

2016

579

1345

9

84

4480

5480

18223

18614

56

109

84

292

842

396

9

98

4392

4396

19322

19250

397

124

294

523

3550

1035

9

164

3939

7747

15722

19334

9293

10140

6596

15536

38073

8123

11

70

5323

7370

19574

19915

137

129

274

282

6222

1532

11

84

2284

5310

19957

20569

182

375

46

434

5513

1093

11

98

3086

4028

22451

22192

291

912

80

906

9555

2074

11

126

4015

4985

20250

18866

3628

6574

3074

7138

20642

4542

Рекомендуем прочитать:  Хрупкие кошки. Течка.

птичник №2 IBV (ИБК)
Рисунок 1

птичник №9 IBV (ИБК)
Рисунок 2

птичник №11 IBV (ИБК)
Рисунок 3

птичник №2 IBD (ИББ)
Рисунок 4

птичник №9 IBD (ИББ)
Рисунок 5

птичник №11 IBD (ИББ)
Рисунок 6

птичник №2 AE (ИЭМ)
Рисунок 7

птичник №9 AE (ИЭМ)
Рисунок 8

птичник №11 AE (ИЭМ)
Рисунок 9

птичник №2 MS (МС)
Рисунок 10

птичник №9 MS (МС)
Рисунок 11

птичник №11 MS (МС)
Рисунок 12

птичник №2 MG (МГ)
Рисунок 13

птичник №9 MG (МГ)
Рисунок 14

птичник №11 MG (МГ)
Рисунок 15

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СЫВОРОТКИ В ELISA «BIOCHEK» И РТГА НА НАЛИЧИЕ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ССЯ-76

Таблица 2

Птичник

Возраст,
дн.

Средние значения уровня антител

ELISA – «BioChek»

РТГА

Титр

Титрогруппа

Разведение

Log2

2

126

2414

2,8

16

2,8

2

163

11636

8,3

333

7,2

5

168

12595

8,6

435

8,5

9

164

4945

4,9

65

4,6

11

126

1634

2,4

37

3,2

14

126

2095

4,0

90

4,3

18

126

3969

4,7

105

5,8

18

163

12328

8,6

314

7,4

При исследовании в ИФА и РТГА сыворотки крови кур, привитых против ССЯ-76-инфекции инактивированной эмульсионной вакциной, получены относительно сопоставимые результаты. Напряженность поствакцинального иммунитета у птиц в ИФА составила 100% в РТГА – 90%. Незначительные различия можно объяснить требованиями инструкции в оценке качества поствакцинального иммунитета у птиц к ССЯ-76 при исследовании различными методами. Установлено также, что величина значений РТГА-титров сывороточных антител, выраженная в log2, соизмерима с таковой в ELISA-титрогруппах (1).

Результаты исследования сыровотки в ELISA «BioChek» и РТГА на наличие антител к вирусу ССЯ-76
Рисунок 16 Результаты исследования сыровотки в ELISA «BioChek» и РТГА на наличие антител к вирусу ССЯ-76

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Установлено, что тест-системы «ИФА-АВИВАК» и ELISA – «BioChek» одинаково пригодны для оценки качества поствакцинального иммунитета у кур.

ИФА с использованием тест-системы «BioChek» и реакция торможения гемагглютинации (РТГА) сравнительно соизмеримы и позволяют проводить контроль напряженности поствакцинального иммунитета у птиц к ССЯ-76.

Список литературы
1. Вакцинация – основа эпизоотического благополучия птицехозяйств. Хохлачёв, О.Ф., Калинин, А.Н.,
2. Гаврилов, С.Н., Серова, Н.Ю.. Москва : IV Международный ветеринарный конгресс по птицеводству, 2008.
3. A simpl method for recording and analising serological data. Brugh, j. №2, 1978 r., Avian Dis., Т. V.22, стр. 362 – 365.

Подготовлено по материалам «VIого Международного Ветеринарного Конгресса по Птицеводству» для webmvc.com

Рекомендуем прочитать:  Специфическая профилактика вирусных болезней собак

Добавить комментарий