Иммуногистохимический анализ экспрессии онкогена c-yes в опухолях молочных желез собак

Мищенко С.Н. -ДГАУ; Мационис А.Э. академик РАЕН, доктор медицинских наук
Ростовское областное патологоанатомическое бюро; Отдел экспериментальной патологии

Источник: материалы Московского международного ветеринарного конгресса

В последнее время интерес к роли онкогенов и генов супрессоров опухоли в этиологии и прогрессировании многих опухолей существенно возрос, поскольку исследования этих генов дали полезную информацию о течении злокачественных заболеваний и помогли в выборе лечения (Harris, С. С. and Hallstein, M. 1993). Изменения в структуре и экспрессии протоонкогенов, как было показано Schneider, J., Rubio, М-Р., Barbazan, M. J. 1994, оказывают влияние на развитие и прогрессирование опухолей.

Одним из механизмов этого является амплификация и сверхэкспрессия генов протеинкиназного семейства. Эти гены контролируют клеточный рост путем фосфорилирования тирозин- или серин-треониновых остатков на белке и представляют многие из известных клеточных онкогенов и рецепторов фактора роста. Дифференциальная диагностика опухолей с помощью иммуногистохимии основывается на фундаментальных особенностях опухолевого роста, к которым относится сохранение экспрессии функционирующих генов (для ряда белков) в условиях злокачественной трансформации клетки (С.В. Петрова, А.П. Киясова, 1998).

Материалы и методы. Для изучения экспрессии онкогена c-yes были исследованы опухоли молочных желез 56 собак. Для иммуногистохимического метода использовались тканевые срезы из парафиновых блоков толщиной 3 мкм. Иммунореактивность первичных антител фирмы DAKO обнаруживали с помощью вторичных антител, конъюгированных с пероксидазной системой, составляющей набор реактивов En Vision TM + System фирмы DAKO.

Предварительную обработку срезов ферментами, СВЧ-излучением или с помощью высокой температуры под давлением (press-cooke) проводили в соответствии с протоколами для соответствующих антител. DAKO EnVision™+ System, HRP является двухэтапным иммуногистохимическим методом окрашивания. Данная система высоко чувствительна и основана на маркированном пероксидазой полимере (HRP), который конъюгирован с вторичными антителами. Этот маркированный полимер не содержит авидина или биотина, на которых основаны многие другие методы иммуногистохимического окрашивания, что исключает или значительно снижает неспецифическое окрашивание, возникающее вследствие эндогенной тканевой авидин-биотиновой активности.

Рекомендуем прочитать:  Серения для кошек и собак — инструкция по применению

Все реактивы DAKO EnVision™+ System, HRP с АЕС+ субстратом выпускаются в готовой для использования форме. Для блокирования любой эндогенной активности препараты инкубировались с блокатором эндогенной пероксидазы на 5-ой минуте. Сначала препараты инкубировали с соответствующим разведенным первичным антителом а затем с маркированным полимером с использованием двух, следующих друг за другом, 30-минутных инкубирований. Окрашивание заканчивалось 5-30-минутным инкубированием с З-амино-9-этилкарбазолом (АЕС)+ субстракт-хроматогеном, в результате чего образовывался красным окрашенный осадок в зоне наличия исследуемой антигенной структуры. В некоторых случаях, особенно в случае изучения локализации антигенов в ядре, применялся другой хромоген диаминобензидин, который давал темно-коричневое окрашивание. Результаты. Экспрессия c-yes определялась в железистом эпителии 19 из 56 опухолей молочных желез. Иммунореактивность неизменно наблюдалась в цитоплазме, ее интенсивность была различной. Одинадцать случаев (5 простых аденом, 5 сложных аденом и 1 миоэпителиома) из 23 доброкачественных опухолей были c-yes позитивными. В злокачественных опухолях экспрессия c-yes наблюдалась в 8 из 33 опухолях (4 простых аденокарциномы, 3 сложных и 1 случай карциносаркомы).

Выводы. Экспрессия c-yes определялась в 47,8% и 24,24% доброкачественных и злокачественных опухолей соответственно. Так же экспрессия c-yes обнаруживалась в различных эпителиальных клетках нормальных тканей, которые предположительно играли определенную роль в передаче сигнала, исходящего от активированных рецепторов клеточной поверхности. Эти рецепторы играют важную роль в пролиферации и дифференциации клеток. Установленная сверхэкспрессия онкогена c-yes указывает на высокий злокачественный потенциал опухолей молочных желез у собак.

Добавить комментарий