Диагностика неоспороза животных с помощью полимеразной цепной реакции

В.Т. Заблоцкий, З.П. Мутузкина, Э.А.Кузнецова, И.И.Бенедиктов, Ю.М.Романова
Всероссийский НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко, Москва
Всероссийский институт гельминтологии им. К. И. Скрябина, Москва

Источник: материалы Московского международного ветеринарного конгресса

В последние годы во всем мире активно изучается недавно идентифицированное протозойное заболевание – неоспороз, возбудителем которого является Neospora caninum – облигатный внутриклеточный паразит, вызывающий аборты, неонатальную смертность у сельскохозяйственных и домашних животных, а также тяжелые неврологические заболевания у молодняка различных млекопитающих: буйволов, крупного рогатого скота, верблюдов, лошадей, овец, коз, оленей, собак, рыжих лисиц, кошек и других животных.

Большое значение приобретает разработка современных методов диагностики неоспороза. Генно-молекулярные методы диагностики, а именно полимеразная цепная реакция, зарекомендовали себя как наиболее чувствительные и специфичные экспресс-методы диагностики в медицине и ветеринарии. Поэтому представляется интересным разработка амплификационной тест-системы на основе полимеразной цепной реакции для идентификации возбудителя неоспороза животных.

Для разработки ПЦР тест-системы для идентификации возбудителя неоспороза использовали в качестве модели культуру Neospora caninum штамм NC-1 (Dubey J.P., Lindsay D.S., 1989).

При разработке применялись специфические олигонуклеотидные праймеры Np21 и Np6, являющиеся участками секвенированной области хромосомы Neospora caninum. Специфические олигонуклеотидные затравки позволяли амплифицировать фрагмент ДНК Neospora caninum размером 337 п.н. Анализ молекулярной структуры праймеров проводили с использованием компьютерной программы OLIGO, версия 3.3 (Richlic W., Roads R.E., 1989).Химический синтез праймеров был осуществлен Н-фосфатным методом на автоматическом синтезаторе "ASM – 102U" («Биоссет», Россия).

Для проверки таксономической специфичности амплификационной тест-системы для идентификации неоспороза использовали ДНК 22 различных видов микроорганизмов (в том числе ДНК трех видов близкородственных простейших), а также эукариотические ДНК человека и 10 видов животных. Разработанная ПЦР тест-система выявляет только ДНК Neospora caninum, что говорит о е высокой специфичности.

Рекомендуем прочитать:  Клозатрем – инструкция по применению для жвачных животных

Для определения чувствительности использовали серию 10-кратных разведений лизата культуры Neospora caninum с концентрацией 1,3 х 106 кл/мл. Тест-система позволила выявлять 10 – 100 клеток неоспор в исследуемом образце.

Данная разработанная ПЦР тест-система позволяет проводить специфическую идентификацию Neospora caninum и одновременно может быть использована для подтверждения диагноза при использовании традиционных методов диагностики неоспороза животных.

Добавить комментарий